Tipos de pruebas de detección de endotoxinas bacterianas

Según el Laboratorio Copisa, el ensayo de lisado de amebocitos de Limulus(LAL) dispone de tres métodos analíticos para determinar las endotoxinas bacterianas. Estos métodos son:

Método Gel-Clot

La cantidad de gel producida por la reacción que se produce en el lisado de amebocitos cuando hay endotoxinas se mide mediante el método Gel-Clot o de gelificación. Las endotoxinas provocan una serie de reacciones en cadena que coagulan la proteína coagulina en la hemolinfa del cangrejo Limulus Polyphemus. Esta respuesta es claramente visible por la aparición del gel en el tubo de ensayo. Para determinar si la prueba de LAL ha dado un resultado positivo mediante el método del coágulo de gel, debe invertirse el tubo de reacción y comprobar que el gel producido tras este procedimiento sigue distinguiéndose de la mezcla. 

Esta aplicación cualitativa del método del coágulo de gel es ideal para pruebas rápidas en las que es importante determinar si una muestra ha sido contaminada o no por bacterias Gram negativas. La cantidad de endotoxinas presentes en la muestra se determina con la cantidad de gel que se forma en el tubo de reacción.

Método Turbidimétrico

Estas endotoxinas reaccionan con la hemolinfa que contiene el cangrejo, y al reaccionar se ven como proteínas sólidas, lo que altera la muestra. Por ello, al aplicar este método se puede detectar la presencia de endotoxinas. 

Las mediciones pueden realizarse por el método cinético o de punto final. El método cinético es el que se utiliza con más frecuencia en la industria para el control de calidad de los productos y la materia prima.

Método Cromogénico

El método cromogénico utilizado en el LAL consiste en añadir un agente revelador del color que permite cuantificar las endotoxinas observando la absorbancia de la muestra. La P-nitroanilina se encuentra inicialmente en un estado incoloro, ya que está unida a un péptido, y se libera en proporción a la cantidad de endotoxinas en la combinación. Este método se emplea con el objetivo de calcular la concentración de endotoxinas a través de la construcción de una curva de calibración.

Cualquier molécula que absorba en longitudes de onda próximas al máximo de absorción de la p-nitroanilina puede alterar los resultados del análisis, como ocurre con cualquier método cromogénico, por lo que la muestra examinada debe estar libre de interferencias en la zona de medición.

Prueba de endotoxinas bacterianas

¿Qué es?

La producción de estructuras venenosas en las paredes celulares de bacterias gramnegativas en el producto es lo que se entiende como una prueba de endotoxinas bacterianas(LAL). Deben tenerse en cuenta los medicamentos, las aguas de diálisis y otros dispositivos médicos que entran en contacto con nuestro organismo. Además, durante la producción, puede cambiar el número de muestras a examinar en función del número de lotes.

Las endotoxinas son la última forma de arma que puede desplegarse inmediatamente antes de que mueran las bacterias gramnegativas, por resumirlo brevemente. La contaminación por endotoxinas se emplean en diferentes ámbitos. Entre ellas se encuentran la administración de diálisis, la preparación o envasado de dispositivos médicos, la fabricación de productos biológicos y el uso de medicamentos inyectables.

Tratamiento de diálisis

El agua utilizada para este tratamiento es muy importante. El sistema inmunitario de las personas enfermas debe protegerse con el máximo cuidado. Reduciendo o suprimiendo los valores que figuran en la farmacopea, es posible reducir la cantidad de endotoxinas con el objetivo de satisfacer esta demanda.

El agua o cualquier otra sustancia que entre en contacto con el paciente podría estar contaminada con endotoxinas, por ello, es necesario extremar las precauciones al emplearlas. Además, al lavar el instrumental, el contacto con el agua puede propagar los contaminantes. 

La propagación de la enfermedad no puede detenerse, por mucho que se intente, debido al potencial de transmisión de las bacterias endotoxinas. Hay medidas que pueden tomarse para evitar la contaminación bacteriana, pero lamentablemente, por muchas medidas que se tomen, el peligro de contaminación sigue existiendo.

En la actualidad, la mala perfusión tisular, la coagulación intravascular diseminada y las lesiones vasculares son los bacilos entéricos negativos más prevalentes. Endotoxemia es el término que designa la aparición de endotoxinas en la sangre humana, que posteriormente puede provocar un shock séptico.

Además, las cajas farmacéuticas se utilizan para el tratamiento de residuos de endotoxinas, por lo que es crucial seguir esta técnica para proteger al usuario del medicamento de la infección. Además, los LPS deben destruirse a una temperatura superior a 300 C. 

Los niveles de endotoxina disminuyen como resultado de variables como el tiempo de calentamiento y la temperatura. Cuando las ampollas y jeringas de vidrio se mantienen a 30 grados durante un periodo aproximado de 1.000 minutos, los niveles de endotoxinas pueden reducirse 250 veces en algunos hornos de despirogenación diseñados específicamente para este fin.